期刊简介
本刊是由广东医学院主办的综合性医学学术刊物（双月刊），国内外公开发行；是中国核心期刊(遴选)数据库、中国期刊全文数据库收录期刊，中国学术期刊综合评价数据库统计源期刊，广东省优秀科技期刊。
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首页>广东医科大学学报杂志
- 杂志名称：广东医科大学学报杂志
- 主管单位：广东省教育厅
- 主办单位：广东医科大学
- 国际刊号：1005-4057
- 国内刊号：44-1731/R
- 出版周期：双月刊
期刊荣誉：广东省优秀科技期刊一等奖（第二届）期刊收录：知网收录(中), 维普收录(中), 国家图书馆馆藏, 上海图书馆馆藏
重组人PRL-3蛋白的表达、鉴定和酶动力学分析
何太平；梁念慈
关键词：PRL-3, 蛋白表达, 酶动力学
摘要：目的 构建融合蛋白pCold Ⅱ-His-PRL-3表达质粒,并进行诱导表达、纯化、鉴定和酶动力学分析.方法 通过基因重组技术构建pCold Ⅱ-His-PRL-3融合蛋白表达载体,并在ArcticExpress E.Coli中表达融合蛋白.经Ni2+-NTA层析纯化,PRL-3蛋白用SDS-PAGE和Western blot初步鉴定,基质辅助激光解吸/电离直角型飞行时间质谱(MALDI-TOF-TOF)确证,并进行酶动力学分析.结果 重组载体pCold Ⅱ-His-PRL-3包含正确的PRL-3编码序列,经IPTG诱导后能正确表达融合蛋白,Western blot显示表达蛋白具有抗原性,质谱分析结果显示目的蛋白氨基酸序列与PRL-3蛋白完全相符.PRL-3酶的米氏常数Km为6.59μmol/L,催化常数Kcat为0.44 min-1.结论 构建的pCold Ⅱ-His-PRL-3重组载体可表达具有酶活性的PRL-3蛋白,为PRL-3酶抑制剂的筛选奠定了基础.
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