期刊简介
本刊是由广东医学院主办的综合性医学学术刊物（双月刊），国内外公开发行；是中国核心期刊(遴选)数据库、中国期刊全文数据库收录期刊，中国学术期刊综合评价数据库统计源期刊，广东省优秀科技期刊。
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首页>广东医科大学学报杂志
- 杂志名称：广东医科大学学报杂志
- 主管单位：广东省教育厅
- 主办单位：广东医科大学
- 国际刊号：1005-4057
- 国内刊号：44-1731/R
- 出版周期：双月刊
期刊荣誉：广东省优秀科技期刊一等奖（第二届）期刊收录：知网收录(中), 维普收录(中), 国家图书馆馆藏, 上海图书馆馆藏
酵母细胞中构建HL-60细胞的酵母双杂交cDNA文库
黄功华；梁景耀；刘新光；梁念慈
关键词：酵母细胞, HL-60细胞, cDNA文库, SMART技术, 同源重组
摘要：目的:以酵母穿梭表达质粒pGADT7-Rec为载体,采用CLONTECH SMART(switching mechanism at 5'end of RNA transcript)技术,在酵母细胞中构建HL-60细胞的酵母双杂交cDNA文库.方法:从体外培养的HL-60细胞中提取总RNA,利用经修饰的CDSⅢ引物合成cDNA第一链,在链的末端可自动延伸CCC,在反应体系中加入SMART ⅢTMOligo作为cDNA第二链合成的引物,进行长距离(LD)-PCR合成双链cDNA,后者经CLONTECH CHROMA SPIN+TE-4000柱纯化后,与线性质粒pGADT7-Rec共转化感受态酵母菌AH109,二者在酵母细胞中利用酵母细胞内具有较高的同源重组酶活性,进行同源重组成环行的有复制活性的文库质粒,在缺亮氨酸(LEU)培养板上筛选出所有克隆,即为人HL-60细胞的酵母双杂交cDNA文库.结果:共获得1.03×106转化子,文库扩增后,插入cDNA长度在0.1 kb～1.5 kb之间.结论:在酵母细胞中利用CLONTECH SMART技术成功构建了HL-60细胞的酵母双杂交cDNA文库.
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